发布时间: 2025-11-12 · 新闻信息
电转仪(Electroporator)是一种通过电场将外源性物质(如DNA、RNA、蛋白质等)导入细胞的实验设备。使用电转仪时,需要按照特定的操作步骤进行,以确保转化的成功率和细胞的存活率。以下是电转仪的详细使用方法。
检查设备:确保电转仪的所有部件(如电极、控制面板、冷却系统等)都正常工作。
设置电转仪参数:根据实验需求,设置电转仪的电压、脉冲宽度和脉冲次数等参数。通常情况下,电压范围在1-5kV之间,脉冲宽度为1-10毫秒,脉冲次数为1-10次。
电压:对于不同的细胞类型,电压的设置可能不同。一般细菌需要较低的电压(1-3kV),而哺乳动物细胞则需要较高的电压(2-5kV)。
脉冲宽度和次数:这些参数通常根据细胞类型的耐受性和实验需求进行调整。
细胞准备:根据实验需要,培养适当数量的细胞,通常使用对电转化有较好接受性的细胞系。
DNA/RNA准备:准备好需要转化的外源性物质(如质粒DNA、siRNA、CRISPR/Cas9工具等)。注意,DNA需要进行提纯,去除其他杂质。
转化缓冲液:准备电转化所需的缓冲液,一般为含有甘油或其他保护剂的溶液。缓冲液用于减少电转化过程中的细胞损伤。
确保电转仪处于干净、稳定的环境中,避免高温、高湿度等不良影响。
使用冷却装置确保电转仪在操作过程中的稳定性,并保护细胞免受过度热量影响。
培养细胞:在转化前,细胞需在适宜的培养基中生长至对数生长期。细胞密度过高或过低都会影响转化效率。
离心收集细胞:将细胞通过离心沉淀,使其浓缩。通常,细胞密度在10^8到10^9个/mL之间最佳。
去除培养液:去除培养液后,加入电转化缓冲液。使用的缓冲液应根据细胞类型和实验要求来选择。
洗涤细胞:为了去除培养液中的杂质,可以用缓冲液洗涤细胞1-2次。
将纯化后的DNA溶液加入到细胞悬液中,通常DNA浓度为1-10 µg/100 µL细胞悬液。
轻轻混合,确保DNA均匀分布在细胞悬液中。
将DNA和细胞混合物转移到电转化瓶中(通常使用特定材质的玻璃或塑料瓶),并确保电极浸入液体中。避免气泡的产生,气泡可能影响电转化的效果。
一些电转仪要求使用特定的电转化杯或电转化管,需要根据设备要求选择合适的容器。
将含有细胞和DNA的电转化管放入电转仪的电极夹中,确保电极接触良好。
设置电转仪的电压、脉冲宽度、脉冲次数等参数。根据细胞的耐受性和电转化的实验要求,选择合适的参数。
细菌转化:一般电压设置在1-3 kV之间。
哺乳动物细胞转化:电压设置在2-5 kV之间。
启动电转仪,电转化过程一般只需几秒钟,电场会在几毫秒内对细胞施加。
离心细胞:电转化后,将细胞悬液迅速转移到预冷的离心管中,并进行低速离心,去除多余的缓冲液。一般可以设置离心速度为1000-2000 rpm,离心时间为5分钟。
重悬细胞:去除离心后的上清液后,加入适量的新鲜培养基,重悬细胞。
将重悬的细胞放入培养皿中,继续在适宜的温度(一般为37℃)下培养,以允许细胞恢复并开始表达外源基因。
根据实验要求,可能需要使用抗生素选择性培养基(如果使用的是带有抗性标记的DNA)来筛选转化成功的细胞。
细胞类型选择:
对于不同类型的细胞,电转化的电压、脉冲宽度等参数需要进行优化。细胞的大小、膜的厚度、外源性物质的类型都会影响转化效果。
缓冲液的选择:
使用合适的缓冲液可以减少电转化过程中的细胞损伤。通常,含有甘油的缓冲液有助于保护细胞膜。
电转化时间的控制:
电转化过程必须控制在短时间内,避免过长的电场作用时间引发细胞死亡。
避免过度电场:
电转化过程中,电场过强或过长会导致细胞膜的严重破坏,影响转化率。因此,电转化的电压和时间需要根据不同细胞进行优化。
设备校准:
定期校准电转仪设备,确保其正常工作,以提高实验的可重复性和准确性。
长沙实了个验仪器制造有限公司生产的电转仪,采用高精度的电场控制技术,能够根据实验需求调整电压、脉冲时间和频率,确保细胞转化的高效性与稳定性。其电转仪具有以下特点:
精准的电场控制:通过智能控制系统,用户可以精确设置电转化参数,确保不同类型细胞的高效转化。
简便的操作:设备操作界面简洁直观,实验人员可以轻松上手,进行快速调整。
稳定的性能:该电转仪具有很高的稳定性,适用于多种实验场景,包括基因转化、细胞表达、CRISPR/Cas9等领域。
优质的售后服务:长沙实了个验仪器制造有限公司为电转仪提供3年质保,并实行“只换不修”政策,确保用户在使用过程中的无后顾之忧。
电转仪是基因转化、细胞生物学研究等领域中不可或缺的重要工具。通过电场的作用,电转仪可以高效地将外源性分子引入细胞中,广泛应用于基因工程、细胞表达、药物筛选等领域。掌握电转仪的正确使用方法,能够提高实验效率,获得高质量的实验结果。

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