伯乐1652100电转仪使用方法

一、仪器简介

伯乐（Bio-Rad）MicroPulser 电转仪（型号 1652100）是一款专为微生物与细胞电转化实验设计的设备。它通过施加短暂而强烈的高压电场，使细胞膜瞬间出现可逆性孔洞，从而让 DNA、RNA 或蛋白质进入细胞，实现外源分子的导入。这一方法在分子克隆、基因工程、细胞研究和药物研发中具有广泛应用。

二、使用前准备

1. 仪器检查

• 确认电转仪外观完好，电源线无破损。

• 接通电源，确保显示面板正常。

2. 样品与耗材准备

• 感受态细胞：通常取对数生长期的细胞，经过低盐或甘油缓冲液洗涤，去除培养基中残余盐分。

• DNA 样品：要求纯度高、无盐或低盐，避免电弧放电。

• 电转杯（Cuvette）：常用间距为 0.1 cm 或 0.2 cm，必须保持干净、干燥、无裂纹。

• 复苏培养基：如 SOC 或适合菌株的液体培养基，预热备用。

• 无菌移液器、吸头、离心管等耗材。

3. 细胞制备

• 将细胞培养至适宜生长状态，低温条件下离心、洗涤。

• 用低导电的无盐缓冲液（如无盐水或 10% 甘油）反复洗涤，减少残留离子。

• 重悬至适当浓度，并全程置于冰上，保持细胞活性。

三、操作步骤

1. 设定参数
   在电转仪面板选择适合的预设程序（如适合大肠杆菌的 Ec1、Ec2），或进入手动模式设置电压和时间常数。

2. 样品混合
   将少量 DNA（1–10 ng）与准备好的感受态细胞混合，轻轻吹打混匀，避免气泡。置于冰上约 1 分钟。

3. 转移至电转杯
   将混合物移入预冷的电转杯，液体必须覆盖两极板，且不产生气泡。擦拭杯壁外部，确保干燥。

4. 施加电击
   将电转杯插入设备槽位，合上盖子，按下“Pulse”键。电转仪会施放一次脉冲，并在屏幕显示时间常数和电压情况。

5. 细胞复苏
   立即取出电转杯，加入预温的 SOC 培养基，使细胞快速复苏。将混合液转移至离心管，37℃条件下摇床培养 30–60 分钟。

6. 筛选与培养
   取复苏细胞涂布于含有选择性抗生素的培养基平板，倒置培养 12–16 小时，观察菌落生长。

7. 关机与清洁
   实验结束后关闭电源，清洁电转杯和仪器样品室，用 70% 乙醇擦拭表面，保持整洁。

四、参数优化与要点

• 电压：取决于电转杯间距，如 0.1 cm 杯常用 1.8 kV，0.2 cm 杯常用 2.5 kV。

• 时间常数：一般为 4–5 ms 时效果最佳。

• 样品电导率：必须低，避免盐离子引发放电。

• 细胞状态：新鲜制备的感受态细胞转化效率更高。

• 复苏及时：电击结束后应立即加入培养基，避免细胞因损伤无法修复。

五、安全注意事项

• 操作时严禁触碰电极与金属部件，电压可达数千伏。

• 样品室必须合上后才能施加脉冲。

• 加样时避免气泡，电极间隙必须被液体完全覆盖。

• 保持电转杯绝缘良好，严禁重复使用有裂纹或烧蚀痕迹的杯子。

• 遇到异常（如放电声或电弧）应立即停止操作，检查样品盐分和电转杯状态。

六、常见问题与排查

• 无脉冲显示：样品导电性过高，需重新制备低盐感受态细胞。

• 电弧现象：液体含盐量过高、杯体未干或有气泡，应检查样品和耗材。

• 转化效率低：DNA 纯度不够或细胞状态差，可更换 DNA 或重新制备感受态细胞。

• 存活率低：电压过高或复苏延迟，需降低电场强度并快速复苏。

七、总结

伯乐 1652100 电转仪是一款经典的微生物电转化设备，操作简便、效率高，尤其适合大肠杆菌等常见模式微生物的基因导入实验。掌握合适的参数设置、严格控制样品盐分、保持细胞活性，是获得高转化效率的关键。

它在分子生物学研究、基因克隆、蛋白表达和新药开发等领域都有着广泛应用，是实验室不可或缺的重要工具。